高压破菌系统

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高压破菌系统 一种重组幽门螺杆菌热休克蛋白基因工程疫苗制备中的纯化方法,其特征在于用发酵方式高密度表达后,采用高压破菌过滤,镍离子亲和层析浓缩裂解凝胶过滤层析及复性技术的顺序组合,获得高纯度,步骤如下高压破菌将高效表达可溶性重组幽门螺杆菌热休克蛋白的大肠杆菌工程菌菌体以镍离子亲和层析平衡缓冲液混悬浮,预冷后采用细胞匀浆机使其混合均匀,用高压均质机破菌,高速离心,收集上清;过滤将上述上清液通过微孔滤膜过滤待用;镍离子亲和层析柱纯化选择镍离子亲和层析柱进行初步纯化,使用在条件下对目标蛋白进行纯化,采用咪唑梯度洗脱;浓缩裂解将步骤初纯化样品浓缩后加盐酸胍或,以及或β巯基变性裂解;凝胶过滤层析纯化将步骤所获得的变性蛋白样本,用凝胶过滤柱纯化,用凝胶过滤平衡缓冲液平衡;复性将步骤纯化样品采用稀释等容透析法或层析柱复性法复性,复性后的样品,采用凝胶过滤层析分离单体和聚体。。本发明公开了重组幽门螺杆菌热休克蛋白A基因工程菌疫苗制备中的纯化工艺。采用对基因工程菌进行高压破菌过滤,镍离子亲和层析纯化浓缩裂解凝胶过滤层析及复性等技术,获得高纯度的重组幽门螺杆菌热休克蛋白A。该发明纯化工艺简捷容易放大重复性好,所获目标蛋白纯度高,动物试验证明本发明纯化获得的重组幽门螺杆菌热休克蛋白A具有较好的免疫活性和免疫保护性。。鏈彂鏄庢秹鍙婁竴绉嶈€愮敳姘цタ鏋楅噾榛勮壊钁¤悇鐞冭弻閲嶇粍鍙屼簹鍗曚綅鍩哄洜宸ョ▼鐤嫍鍊欓€夋姉鍘烮鍒跺涓殑绾寲鏂规硶锛屽叾鍖呭惈姝ラ锛氭敹闆嗗埗澶囩殑鎵€杩版姉鍘燂紱楂樺帇鐮磋弻銆佺蹇冿紝纭吀閾靛垎姝ユ矇娣€锛孏浜插拰灞傛瀽銆丳閰跺垏銆佺紦鍐叉恫缃崲銆丷灞傛瀽銆佸嚌鑳惰繃婊ゅ眰鏋愭妧鏈殑椤哄簭缁勫悎瀵瑰埗澶囩殑鎶楀師杩涜绾寲銆傛湰鍙戞槑鎻愪緵鐨勭函鍖栨柟娉曠畝鎹枫€佸鏄撴斁澶с€侀噸澶嶆€уソ锛屾墍鑾风洰鏍囪泲鐧界函搴﹂珮锛屽姩鐗╄瘯楠岃瘉鏄庣函鍖栫殑鎶楀師鍙湁鏁堝埡婵€鏈轰綋浜х敓杈冮珮鐨勪綋娑插厤鐤簲绛斿拰鑹ソ鐨勫厤鐤繚鎶や綔鐢紝閲囩敤鏈彂鏄庢柟娉曠函鍖栫殑鎶楀師锛屽叾绾害鈮銆。作者郭鹰邹全明朱永红吴超张卫军机构第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆刊名免疫学,关键词幽门螺杆菌热休克蛋白柱层析文摘目的对重组幽门螺杆菌热休克蛋白大肠杆菌工程菌表达的蛋白进行纯化研究。方法酵后的重组大肠杆菌进行高压破菌后,采用镍离子亲和柱层析和凝胶过滤柱层析相结合的方法分离纯化,使用和鉴定蛋白纯度,注射免疫家兔检测纯化后的的免疫学活性。结果所纯化获得的蛋白纯度,总回收率为,并且保持了良好的免疫学活性。结论建立了从重组大肠杆菌中纯化高纯度的工艺,为疫苗的进一步研究提供了材料。下载地址点此下载。现将载体构建好了,但不知道接下来怎么做载体是检测都合适了,现在想跑个–但不知道怎么做要把检测合适的构建好的重组挑斑摇菌,然后用诱导这个诱导剂浓度是多少然后离心取上清跑–还是怎么做跑出的胶怎么分析跑胶用的是多少怎么算自己的目的蛋白是多大呢本人是一塌糊涂请大家给予多多的意见和资料谢谢谢谢。本发明公开了重组幽门螺杆菌热休克蛋白基因工程菌疫苗制备中的纯化工艺。采用对基因工程菌进行高压破菌过滤,镍离子亲和层析纯化浓缩裂解凝胶过滤层析及复性等技术,获得高纯度的重组幽门螺杆菌热休克蛋白。该发明纯化工艺简捷容易放大重复性好,所获目标蛋白纯度高,动物试验证明本发明纯化获得的重组幽门螺杆菌热休克蛋白具有较好的免疫活性和免疫保护性。。光盘编号重组幽门螺杆菌热休克蛋白基因工程疫苗制备中的纯化工艺摘要本发明公开了重组幽门螺杆菌热休克蛋白基因工程菌疫苗制备中的纯化工艺。采用对基因工程菌进行高压破菌过滤,镍离子亲和层析纯化浓缩裂解凝胶过滤层析及复性等技术,获得高纯度的重组幽门螺杆菌热休克蛋白。该发明纯化工艺简捷容易放大重复性好,所获目标蛋白纯度高,动物试验明本发明纯化获得的重组幽门螺杆菌热休克蛋白具有较好的免疫活性和免疫保护性。幽门螺杆菌尿素酶亚单位细胞抗原表位多肽及鉴定方法与应用摘要本发明提供了一个来自幽门螺杆菌尿素酶亚单位的中和性细胞抗原表位多肽及其鉴定方法,确定了抗幽门螺杆菌尿素酶亚单位单克隆抗体所对应的抗原表位,并且实此细胞表位为单克隆抗体所的特异性抗原表位;本发明还提供了包含此细胞表位及载体蛋白牛血清白蛋白的嵌合表位疫苗及其制备方法,此细胞表位具有较强的抗原性。本发明的细胞表位作为活性成分制成的疫苗或药物,可以起到预防或清除幽门螺杆菌感染的作用,在医药领域具有广阔的应用前景。幽门螺杆菌基因工程多价亚单位疫苗及其制备。适用于湿菌体超声破碎,实验室规模用。一般可选择直径的超声探头。推荐国产机器为宁波新芝。大规模生产用,对菌体量无限制。破菌效果好,但要注意冷却。均匀悬浮菌体用,比搅拌快,均匀性好,特别适合于大规模生产。另外。
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